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[提取] 2020年版黃精含量制備-打粉、稱量、熱乙醇、趁熱濾過、揮醇與否、顯色反應放冷時間

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藥徒
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本帖最后由 Trocy-zizi 于 2021-3-12 10:58 編輯

  下面為黃精含量測定2020年版(和2015年版一致)的檢驗操作規程           【含量測定】        
         對照品溶液的制備:取經105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品33mg,精密稱定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml中含無水葡萄糖0.33mg)。  
         標準曲線的制備:精密量取對照品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml,分別置10ml具塞刻度試管中,各加水至2.0ml,搖勻,在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度,混勻,放冷后置水浴中保溫10分鐘,取出,立即置冰水浴中冷卻10分鐘,取出,以相應試劑為空白。照紫外-可見分光光度法(通則0401),在582nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。  
         測定法:取60℃干燥至恒重的本品細粉約0.25g,精密稱定,置圓底燒瓶中,加80%乙醇150ml,置水浴中加熱回流1小時,趁熱濾過,殘渣用80%熱乙醇洗滌3次,每次10ml,將殘渣及濾紙置燒瓶中,加水150ml,置沸水浴中加熱回流1小時,趁熱濾過,殘渣及燒瓶用熱水洗滌4次,每次10ml,合并濾液與洗液,放冷,轉移至250ml量瓶中,加水至刻度,搖勻,精密量取1ml,置10ml具塞干燥試管中,照標準曲線的制備項下的方法,自“加水至2.0ml”起,依法測定吸光度,從標準曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量(mg),計算,即得。   
  其中有幾大問題想咨詢請教各位老師和同行:
一)打粉制備。
  樣品需要60℃干燥至恒重的細粉,我們的操作是切薄片,用60℃烘箱烘幾個小時,時間視薄片干燥情況而定,然后打粉過5號篩,繼續打粉過篩直至過不了5號篩,然后過4號篩,繼續打粉過篩至過不了4號篩,全部粉末混勻,完全不能打碎的粉棄除。原則上不應該棄去粉末的,但是打粉研磨也不能碎的粉,接觸面積小而重,混在一起不就影響提取率了嗎?請問大家對于粉末的制備有什么更好的建議或指導呢?
二)恒重、稱量。
  因樣品具有吸濕性,采用含蓋稱量瓶進行干燥、恒重和減重稱量法,用的不銹鋼藥勺,伸進圓底燒瓶內,用乙醇液沖洗著加夠150ml。
  同事的做法是用稱量紙稱量,整份放進燒瓶進行實驗(涉及到后續揮干問題)。  此步同行們又是怎么操作的呢?可以探討一下減少損耗,確保稱重的準確性。
三)熱乙醇。
   80%熱乙醇的制備:取已配制好的80%乙醇溶液適量于合適容器中(我是100ml以內醇溶液于250ml錐形瓶),電熱套或99℃水浴鍋中回流加熱。移除熱源,待幾分鐘沒有回流滴珠就拔掉回流管,此時醇溶液也是熱的。
  請問熱乙醇大家是怎么制備的呢?我這個方法應該能更好地保留配比而且比較安全吧?
四)趁熱濾過。
  此規程中出現兩次“趁熱濾過”,一次是80%熱乙醇(除雜),一次是熱水(提取)。
  “趁熱過濾”,理解為保溫、快速、不損耗。我用抽濾法濾過醇溶液,常壓法濾過水溶液(因為要放涼,怕損耗在回收瓶中),每次使用的熱水都是新沸的熱水。
  同事都是用常壓過濾法,我也用過,比較耗時,因為濾過速率較低,濾紙內的溶液也容易降溫。如果是常壓操作,每次倒一部分進濾紙,都會放回水浴鍋保溫。
  此處思考是:實驗室的趁熱過濾一般會如何操作?抽濾會不會真的致使細粉損耗?用的中速大濾紙抽濾,不是與布氏漏斗同徑的小濾紙,濾紙沒有破損。
  (曾經做過對比試驗,含量結果差不多,但現在的實驗則比較低)
五)揮醇與否。
  多糖類的提取規程中,醇溶液和水溶液的兩提取過程的文字描述全是逗號,沒有句號,也沒有說醇液是棄掉的,感覺規程不嚴謹。類似枸杞子,前面有乙醚液,會很明顯地說明棄去乙醚液,揮干至無味。但醇溶液一字不達,意思是不需要揮干至無醇味,濕噠噠地直接加水?
  但根據操作經驗和咨詢多方實驗室得知,大家都是默認棄去醇液,并揮干至無醇味。而揮干至無醇味的方法又有2種:
  ①濾紙和粉末置水浴鍋表面揮干,圓底燒瓶水浴揮干,立干立移除,整個裝置都在短時間內確保去醇;
  ②濾紙和粉末室溫下放置至肉眼觀察的揮干(程度因人而異),圓底燒瓶不管;
  各位老師和同行,看到規程的描述,你們又會怎么操作呢?是否會除醇呢?除醇的方式又是怎樣的呢?
六)顯色反應時間。
  本法使用硫酸蒽酮參與多糖的顯色反應。從規程中得知,需要先冰水浴中緩慢滴加硫酸蒽酮,搖勻,然后放涼,沸水浴保溫10min,再冰水浴保溫10min,整個反應過程涉及到溫度和時間。
  其中,冰水浴的制備方式是在提前制備的暴露性大冰塊中加常溫水,放置一段時間,冰微融化測溫0-2℃開始實驗。緩慢滴加的速度是1秒1-2滴,使用3ml的塑料滴管手動控制,單次雙管操作。放涼是取出后置室溫下回溫至手觸試管外壁不冰,與室溫水觸感相似,此處所需時間0.5-1h。沸水浴是水浴鍋設置值100℃,溫度計測量達標后使用。第二個冰水浴結束后,因為溫度過低,不適宜立即實驗(比色皿容易產生霧化現象),會放置40min,手觸試管外壁無明顯冷凍感,進行實驗。有的實驗室會放置1.5h甚至2h。
  此處疑問:
  ①各位老師或同行,對“冰水浴緩慢滴加硫酸蒽酮”的具體操作理解是?
  ②含硫酸的實驗都不適宜久置,實驗顯示吸光度隨著放置時間延長而增大。但是冰浴后又不適宜立刻實驗,而每個實驗室的控溫和放冷時間不一樣,結果差異會比較大,哪怕自己實驗室操作穩定,但所謂的標準度在哪里其實是沒法確定的,那紫外的數據可靠性是否還存在?
  黃精的提取制備已經做過很多次,但總會出現這樣那樣的關于細節方面的疑惑,現在把大概的疑惑都羅列出來,也把我們自己的做法展示出來,懇切希望能得到老師和同行們的熱心指導。

  
  
  
  
  
  





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藥徒
沙發
 樓主| 發表于 6 天前 | 只看該作者
走過路過,回復其中一兩個問題也是可以的哈
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藥徒
板凳
 樓主| 發表于 6 天前 來自手機 | 只看該作者
Trocy-zizi 發表于 2021-03-12 16:56
走過路過,回復其中一兩個問題也是可以的哈


電腦排的版,手機看有點錯亂
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藥徒
地板
 樓主| 發表于 6 天前 來自手機 | 只看該作者
關于(熱乙醇)。
我是加熱回流的方法制備,會讓它煮沸。
同事是放置于流動相的含蓋瓶子,扭緊蓋子,水浴加熱,沒有煮沸。
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5#
發表于 3 天前 | 只看該作者
謝謝分享,工作順利
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藥徒
6#
 樓主| 發表于 3 天前 來自手機 | 只看該作者
開始吧 發表于 2021-03-15 07:58
謝謝分享,工作順利

里面有提問的,請問可以稍微寫下您對這些操作的理解或習慣嗎
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